疫苗前沿 | 基于臨床樣本分析，設計多表位mRNA癌癥疫苗

文獻題目：Rationale for multi-epitope TGFβ vaccination in pancreatic cancer: evidence from immunologic and clinical correlates（胰腺癌多表位TGFβ疫苗接種的理論依據：免疫學與臨床相關性的證據）

發表期刊：Signal Transduction and Targeted Therapy

發表時間：2026年3月24日（在線發表）

研究團隊：丹麥哥本哈根大學醫院國家癌癥免疫治療中心

主要研究結果：研究確定了多個具有高度免疫原性的TGFβ衍生表位（TGFβ-15, -33, -38），并證實PDAC患者體內存在針對這些表位的自發性T細胞反應。研究發現，基線時具有高頻率TGFβ-33特異性T細胞的患者，在接受免疫檢查點抑制劑（ICI）聯合放療后表現出更佳的臨床預后。特別是，針對多個TGFβ表位均有反應的患者，其總生存期（OS）和無進展生存期（PFS）顯著延長。此外，研究成功開發了一種編碼多個TGFβ表位的單mRNA構建體，證明了多表位mRNA疫苗激活多種特異性T細胞的潛力。

研究背景

胰腺導管腺癌（PDAC）因其極低的生存率和極強的治療耐受性被稱為“癌王”。盡管免疫檢查點抑制劑（ICIs）在多種腫瘤中取得了革命性進展，但在胰腺癌中卻收效甚微，主要歸因于其高度免疫抑制且纖維化的腫瘤微環境（TME）。在這一環境中，轉化生長因子-β（TGFβ）扮演了關鍵角色。它不僅由癌細胞和癌癥相關成纖維細胞（CAFs）大量分泌，促進腫瘤纖維化和轉移，還能直接阻斷T細胞的浸潤與功能，使腫瘤呈現“冷”表型。現有的TGFβ靶向療法（如單抗或受體抑制劑）療效有限且存在毒性。因此，開發能夠激活抗調節性T細胞、直接消除分泌TGFβ的免疫抑制細胞的免疫調節疫苗（IMVs），成為將“冷”腫瘤轉變為“熱”腫瘤、協同增強免疫治療效果的創新策略。

核心內容詳解

（一）TGFβ衍生表位的免疫原性篩選與特征分析

研究對象與方法：研究人員首先利用覆蓋TGFβ全長序列的38個重疊20聚體肽庫，對31名健康獻血者（HD）進行體外IFNγ ELISPOT篩查。隨后，隨機選取14名來自TRIPLE-R臨床試驗的PDAC患者，驗證這些表位在真實患者群體中的免疫活性。實驗通過12-14天的肽刺激誘導T細胞擴增，再進行二次刺激檢測細胞因子分泌。

研究結果：在健康獻血者中，TGFβ-15、TGFβ-33和TGFβ-38顯示出極高的反應頻率。數據顯示，TGFβ-15與TGFβ-33在HD隊列中的反應強度存在統計學差異。在PDAC患者隊列中，這三個表位同樣能誘導強烈的IFNγ產生。值得注意的是，盡管未達統計學顯著，但TGFβ-33在患者中表現出更強且更頻繁的反應趨勢。細胞內細胞因子染色（ICS）進一步揭示，這些反應主要由CD4+ T細胞介導，但在部分獻血者中也檢測到了針對TGFβ-33的CD8+ T細胞反應。

實驗小結：本部分實驗成功驗證了TGFβ分子中存在多個高效免疫原性區段，其中TGFβ-33被確定為患者體內最活躍的表位之一。這為開發多表位疫苗奠定了候選序列基礎。

（二）循環TGFβ-33特異性記憶T細胞的鑒定

研究對象與方法：為了探究TGFβ特異性T細胞是否在體內已被激活并形成長期免疫保護，研究者使用磁珠分選技術（MACS）從HD和患者的PBMC中分揀出高純度的CD4+CD45RO+記憶T細胞。通過與脈沖了相應肽段的自體單核細胞共培養12天，觀察其增殖與反應能力。

研究結果：ELISPOT和ICS結果均顯示，無論是健康人還是胰腺癌患者，其體內均存在能識別TGFβ-33的記憶T細胞。有趣的是，在ICS分析中，從患者體內富集的記憶T細胞反應強度明顯高于健康獻血者。

實驗小結：胰腺癌患者體內更強的記憶T細胞反應可能反映了腫瘤微環境中TGFβ的過度表達對免疫系統的持續刺激。這一發現證明了利用疫苗進一步擴增這些預存免疫力的可行性。

（三）基線TGFβ免疫反應與胰腺癌患者臨床獲益的相關性

研究對象與方法：研究團隊對27名接受放療聯合檢查點抑制劑治療的PDAC患者進行了前瞻性分析。根據治療效果，患者被分為臨床獲益組（PR或SD，15人）和進展組（PD，12人）。利用ELISPOT檢測患者基線（治療前）對TGFβ-33和TGFβ-15的T細胞反應水平。

研究結果：臨床獲益組患者的基線TGFβ-33反應水平顯著高于進展組。Kaplan-Meier生存曲線顯示，基線TGFβ-33反應高于中位數的患者，其總生存期（OS）和無進展生存期（PFS）顯著延長。更具突破性的是，當同時評估TGFβ-15和TGFβ-33的反應時，對兩種表位均有強烈反應的患者預后最佳，而僅對一種或無反應的患者生存期較短。

實驗小結：數據有力證明了多表位T細胞反應是預測胰腺癌免疫治療成功的關鍵生物標志物。相比單一表位，多表位免疫激活與更顯著的生存獲益直接相關。

（四）特異性T細胞對TGFβ高表達靶細胞的識別機制

研究對象與方法：研究者利用快速擴增方案（REP）建立了多組特異性T細胞系，并測試其對自體樹突狀細胞（DCs）及惡性髓系細胞系THP-1的識別能力。為證明蛋白依賴性，實驗采用了siRNA介導的TGFβ敲低技術和重組蛋白誘導的高表達模型。

研究結果：特異性CD4+ T細胞不僅能識別肽脈沖的DCs，還能上調顆粒酶B和顆粒溶素等細胞毒性分子的表達。在針對THP-1的實驗中，敲低TGFβ顯著降低了T細胞的激活，而外源TGFβ處理增強了識別。值得注意的是，盡管敲低TGFβ會意外增加HLA-II分子的表面表達，但T細胞激活依然下降，這確證了識別過程是由TGFβ抗原豐度驅動的，而非受限于抗原呈遞機器。

實驗小結：實驗從分子水平證實了這些特異性T細胞能夠精準識別并靶向自然表達或過度表達TGFβ的細胞，具備直接攻擊腫瘤微環境內抑制性成分的潛力。

（五）多表位mRNA疫苗構建體的有效性驗證

研究對象與方法：研究團隊設計了一個名為TGFβ-ALL的質粒，編碼包含TGFβ-02、-15、-33和-38四個序列的復合表位區。通過體外轉錄合成mRNA，并將其轉染至自體DCs中，觀察其能否同時激活四種不同特異性的T細胞克隆。

研究結果：轉染了多表位mRNA的DCs能夠成功加工并呈遞所有包含的表位。與對照組相比，共培養導致了四種特異性CD4+ T細胞群體的顯著激活，表現為TNFα和CD107a的高表達。盡管不同表位誘導的反應強度有所差異，但單一mRNA構建體確實實現了多靶點免疫激活。

實驗小結：這一結果驗證了mRNA平臺在多表位疫苗遞送中的優越性，證明了單個構建體即可誘導廣泛的抗腫瘤免疫反應，為臨床轉化提供了直接證據。

小結

本研究深入探討了多表位TGFβ免疫調節疫苗在胰腺癌治療中的理論基礎。研究不僅確定了TGFβ衍生肽在PDAC患者中的高度免疫原性，還揭示了預存的多表位T細胞反應與臨床免疫治療獲益及生存期延長顯著相關。通過成功構建多表位mRNA疫苗并驗證其功能，研究證明了該策略在重塑“冷”腫瘤微環境方面的巨大潛力。這種多表位策略能夠同時激活針對腫瘤細胞及免疫抑制細胞的攻擊，為改善胰腺癌等難治性腫瘤的免疫治療效果提供了極具前景的新路徑。

參考文獻

[1] Ruders JH, Ahmad SM, Mortensen REJ, Met ?, Byrdal M, Chen IM, Theile S, Holmstr?m MO, Andersen MH. Rationale for multi-epitope TGFβ vaccination in pancreatic cancer: evidence from immunologic and clinical correlates. Signal Transduct Target Ther. 2026 Mar 24;11(1):107.

注：本文僅作為醫療健康領域前沿進展分享， 非 治 療 方 案 推 薦。

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撰寫| RNA星球

校稿| Gddra編審| Hide / Blue sea

編輯 設計| Alice