提細(xì)胞外囊泡（EVs），是不容易的。植物榨汁破壁后雜質(zhì)多；動(dòng)物組織，樣本珍貴量少，一步操作失誤全盤(pán)報(bào)廢；細(xì)胞上清，面臨超離、層析、切向流……方法選到頭禿，純度和得率永遠(yuǎn)在打架。

超離都說(shuō)純度高，可自己一轉(zhuǎn)，沉淀里全是蛋白聚集體，得率太低；實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的問(wèn)題，無(wú)法初步標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化，用切向流，濃縮完一測(cè)，顆粒數(shù)也太少了；層析柱聽(tīng)著是高級(jí)，可純化后樣本稀稀拉拉……就算過(guò)了提取這一關(guān)，純度夠不夠？顆粒損失大不大？后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)懿荒苡茫?/strong>審稿人一句「請(qǐng)?jiān)敿?xì)說(shuō)明方法學(xué)依據(jù)」，就能讓你改到崩潰。

這一次，宇玫博生物用一份扎扎實(shí)實(shí)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，一次性把這些問(wèn)題講透了。他們以 293T 細(xì)胞無(wú)血清上清為模型，系統(tǒng)對(duì)比了「切向流」、「切向流 + 層析」、「切向流 + 超離」三種分級(jí)提取工藝。不玩虛的，每一步都用NTA 粒徑、TEM 電鏡、BCA 蛋白濃度的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)說(shuō)話(huà)——純度高不高、顆粒丟沒(méi)丟、成本劃不劃算，一目了然。

而且，宇玫博的大規(guī)模提取服務(wù)，遠(yuǎn)不止于細(xì)胞上清。植物樣本（榨汁破壁）、動(dòng)物組織（勻漿處理）、各類(lèi)細(xì)胞上清，他們均有成熟的標(biāo)準(zhǔn)化工藝流程，可根據(jù)您的樣本類(lèi)型定制化提取驗(yàn)證，幫您繞開(kāi)「樣本不同、方法不適用」的坑。

更值得關(guān)注的是，基于這些標(biāo)準(zhǔn)化工藝，宇玫博還提供多種來(lái)源的外泌體/細(xì)胞外囊泡現(xiàn)貨——均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)檢，批次穩(wěn)定，即買(mǎi)即用，幫您省去方法開(kāi)發(fā)的時(shí)間和試錯(cuò)成本。接下來(lái)，這份對(duì)比實(shí)驗(yàn)報(bào)告，將帶你一次性看清：不同工藝路線(xiàn)，到底該怎么選。

一、分級(jí)策略：從高效富集到極致純化

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級(jí)別一：切向流

提取處理：將 293T 上清原液過(guò) 0.22 μm 濾膜后，使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍，濃縮液過(guò) 0.22 μm 濾膜后即為「切向流」級(jí)提取產(chǎn)品；

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級(jí)別二：切向流 + 層析

提取處理：

1. 將 293T 上清原液過(guò) 0.22 μm 濾膜后，使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍，濃縮液過(guò) 0.22 μm 濾膜；

2. 過(guò)膜后濃縮液過(guò)層析柱，收集外泌體餾分；

3. 使用 300K 中空纖維柱將餾分濃縮 10 倍后過(guò) 0.22 μm 濾膜，得到高純「切向流 + 層析」級(jí)別的外泌體產(chǎn)品。

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級(jí)別三：切向流 + 超離

提取處理：

1. 將 293T 上清原液過(guò) 0.22 μm 濾膜后，使用 300K 中空纖維柱濃縮 10 倍，濃縮液過(guò) 0.22 μm 濾膜；

2. 過(guò)膜后的濃縮液 4℃，100,000 g 超離 120 min 后，用適量 PBS 重懸，重懸液過(guò) 0.22 μm 濾膜后得到「切向流 + 超離」級(jí)別的外泌體產(chǎn)品；

二、硬核數(shù)據(jù)對(duì)比：

所有工藝的性能，最終由數(shù)據(jù)說(shuō)話(huà)。基于 293T 細(xì)胞上清的大規(guī)模提取實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)，三級(jí)方案的差異一目了然：

293T 細(xì)胞上清三種級(jí)別的提取，得到的外泌體產(chǎn)品純度均能達(dá)到 1.0E+08 個(gè)/mL 以上；

作為大規(guī)模提取的第一步，切向流步驟的蛋白去除率在 90% 以上，所以終產(chǎn)品的 BCA 都相對(duì)較低；

切向流去除了大量的蛋白和小顆粒的情況下，層析進(jìn)一步去除部分蛋白，提高了產(chǎn)品純度；

外泌體產(chǎn)品的 BCA 濃度與純度不可兼得，強(qiáng)行濃縮會(huì)使顆粒損失增多；

對(duì)比上清原液與其他提取方法看，超離提取的外泌體體積較少，顆粒損失較高；

單獨(dú)看超離提取得到的外泌體是質(zhì)檢合格的；

三、場(chǎng)景化選擇指南：為您的需求精準(zhǔn)匹配

注：以上數(shù)據(jù)基于 293T 細(xì)胞無(wú)血清上清實(shí)測(cè)。其他細(xì)胞上清（如干細(xì)胞上清、含血清培養(yǎng)上清）可根據(jù)需求提供定制化提取驗(yàn)證。

四、不止于指南：宇玫博（Umibio）能為您做更多

上面的選擇指南是基于細(xì)胞上清，但如果您的研究樣本是植物汁液、動(dòng)物組織、中草藥提取液呢？

宇玫博的大規(guī)模提取服務(wù)，正是為解決這類(lèi)「非標(biāo)樣本」難題而設(shè)。從植物榨汁破壁到動(dòng)物組織勻漿再到各類(lèi)細(xì)胞上清，我們均開(kāi)發(fā)了成熟的標(biāo)準(zhǔn)化工藝流程，可為您提供定制化的提取驗(yàn)證與全鏈條服務(wù)，幫您繞開(kāi)「樣本不同、方法不適用」的坑。

此外，如果您不想耗費(fèi)數(shù)月時(shí)間在方法開(kāi)發(fā)上，宇玫博還提供多種來(lái)源的外泌體/細(xì)胞外囊泡現(xiàn)貨。所有產(chǎn)品均基于上述標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的多維度質(zhì)檢，批次穩(wěn)定、即買(mǎi)即用，助您跳過(guò)最磨人的提取階段，直接聚焦下游功能實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)識(shí)別下方二維碼，可在線(xiàn)咨詢(xún)溝通～

宇玫博（Umibio）分級(jí)提取方案，以清晰的工藝路徑、扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和完善的表征體系，解決了外泌體制備中「純度、得率、濃度」不可兼得的三角難題。研究者可根據(jù)明確的應(yīng)用場(chǎng)景導(dǎo)向，選擇最經(jīng)濟(jì)、最有效的制備路徑，無(wú)需再為方法學(xué)選擇而困擾。同時(shí)，宇玫博將這一技術(shù)體系延伸至植物、動(dòng)物、細(xì)胞等多類(lèi)樣本的大規(guī)模提取服務(wù)，并提供標(biāo)準(zhǔn)化制備的現(xiàn)貨外泌體產(chǎn)品，全方位助力外泌體研究從「提取」到「應(yīng)用」的加速推進(jìn)。選擇宇玫博（Umibio），選擇專(zhuān)業(yè)。讓我們攜手，從精準(zhǔn)制備開(kāi)始，駕馭外泌體的未來(lái)。

內(nèi)容策劃：王丹琦

內(nèi)容審核：吳軍

題圖來(lái)源：圖蟲(chóng)創(chuàng)意