癌細胞表面的可靶向蛋白數量有限，超過七成的腫瘤特異性抗原存在于細胞內部，這使傳統T細胞銜接器（BiTE）抗體藥物常常無法送達腫瘤內部，加上常規BiTE分子本身存在結構不穩定和易聚集的生產難題，其臨床應用受到不小制約。2026年6月25日，廣西醫科大學盧小玲教授團隊在學術期刊《Signal Transduction and Targeted Therapy》上發表了一項題為“TCR-mimic bispecific nanobody-based T cell engager targeting intracellular tumor antigens for cancer immunotherapy”的研究成果，他們成功開發出一個名為TCRm Bi-NbTE的雙特異性納米抗體平臺，該分子通過結合T細胞上的CD3ε與腫瘤細胞表面的肽-MHC復合物，將免疫藥物有效導向細胞內部的腫瘤靶標。

這個TCRm Bi-NbTE分子本質上是由兩個納米抗體串聯而成，其中一個負責搜尋由MHC-I分子呈遞的胞內抗原片段，另一個則負責激活T細胞。研究團隊利用此前篩選到的、能夠特異性識別HLA-A2/WT1或HLA-A2/GPC3復合物的TCR模擬納米抗體，通過柔性連接肽將它們與抗CD3ε納米抗體連接在一起，整個構建過程在大腸桿菌表達系統中完成。純化后蛋白的純度經鑒定超過了百分之九十，產量也達到了后續實驗的要求，生物層干涉技術的測定結果顯示，該分子對CD3ε的平衡解離常數達到了10??摩爾/升量級，對相應pMHC復合物的親和力則在10??摩爾/升水平。夾心酶聯免疫吸附實驗的結果證實同一TCRm Bi-NbTE分子能夠同時捕獲CD3ε和pMHC兩種抗原且互不干擾，這意味著分子兩個結合端能夠各司其職地為后續橋接T細胞與腫瘤細胞做準備。

這種新設計的分子在特異性識別方面的表現相當嚴格，流式細胞術的檢測結果清晰地顯示，TCRm Bi-NbTE能夠精準地結合在HLA-A2陽性且表達WT1或GPC3抗原的腫瘤細胞系上，或者結合那些人為負載了對應特征肽段的T2細胞。相反地，對于同樣帶有HLA-A2但不表達這些抗原的K562、Huh-7、SW480細胞，以及負載了無關肽段的T2細胞，該分子幾乎沒有表現出任何結合能力。研究團隊還利用算法預測了人源蛋白質組中可能發生交叉反應的肽段并逐一驗證，結果均未檢測到陽性信號，進一步開展的丙氨酸掃描突變實驗則精確鎖定了幾個關鍵接觸殘基——WT1肽段上的精氨酸1、天冬酰胺5、丙氨酸6和亮氨酸9，以及GPC3肽段上的纈氨酸2、甘氨酸3、苯丙氨酸5和纈氨酸9，這些位點的單氨基酸替換會顯著削弱甚至消除結合。

在確認靶向精度后，研究團隊評估了分子調動T細胞實施殺傷的能力，他們將TCRm Bi-NbTE與T細胞及靶腫瘤細胞共同培養后，T細胞表面的早期激活標志CD25和CD69均顯著上調，脫顆粒標志CD107a的表達也同步增加，表明T細胞正在準備釋放殺傷性顆粒。CFSE標記的實驗結果證實T細胞在共培養體系中發生了明顯的分裂增殖，而且所有這些活化與增殖反應都嚴格依賴于靶細胞表面存在對應的pMHC復合物。值得注意的是，在持續刺激下部分T細胞向中央記憶型T細胞分化，這類CD45RA?CCR7?細胞亞群比例的增加暗示著TCRm Bi-NbTE誘導的T細胞可能具備更長的體內存活時間和更強的再次應答潛力。伴隨T細胞活化過程的是大量IL-2和干擾素-γ的釋放，酶聯免疫斑點實驗也數出了更多的干擾素-γ陽性T細胞克隆，體外細胞毒性實驗則表明TCRm Bi-NbTE在極低濃度下就能介導T細胞高效殺傷pMHC陽性的靶細胞，殺傷效果隨劑量增加而增強，而對抗原陰性的各株細胞幾乎未造成明顯裂解。

在動物體內驗證階段，研究團隊采用了免疫缺陷小鼠皮下荷瘤模型并輸注人外周血單核細胞，連續六天給予TCRm Bi-NbTE治療后，HepG2-Luc和OVCAR3兩種移植瘤的生長均被顯著遏制，小鼠的生存期也得到了明顯延長。在更為貼近臨床實際的肝癌患者來源異種移植模型中，同樣的治療效果依然成立，治療期間小鼠的體重、血清轉氨酶、炎性因子等安全性指標均未出現異常波動。對腫瘤組織的進一步分析顯示，治療組腫瘤內的凋亡細胞顯著增多而Ki-67陽性增殖細胞減少，瘤內和脾臟中浸潤的CD3?T細胞數量也明顯高于對照組。轉錄組測序的結果則揭示了治療組腫瘤組織中一系列與T細胞活化、增殖、細胞毒性相關基因的表達上調，包括CD3E、CD8A、顆粒酶B、穿孔素和FAS配體等，同時PDCD1和CTLA4等耗竭相關標志也有適度增加，這與持續免疫激活的轉錄特征相吻合，基因本體功能富集分析也證實了T細胞相關生物學通路的顯著富集。這項研究構建的TCRm Bi-NbTE平臺以其模塊化設計和納米抗體自身的穩定性優勢，為實現針對不同胞內腫瘤抗原的快速適配和規模化生產提供了可能，也為那些傳統抗體藥物束手無策的靶點開辟了新的免疫治療路徑。

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